（1）母種制作

組織分離法簡單易行，后代變異小，能保菌株的優(yōu)良特性，它是生產(chǎn)上常用的菌種分離法。種菇應(yīng)選擇外觀典型，大小適中，菌蓋表面鱗片較少，顏色純白無病蟲害的頭潮菇，采摘種菇應(yīng)在雞腿菇生長的棒狀后期或梭形前期。

母種培養(yǎng)基可選擇PDA培養(yǎng)基，也可用如下配方：小麥600克，鮮子實體100克，葡萄糖20克，蛋白胨3克，磷酸二氫鉀0.5克，磷酸氫二鉀1克，硫酸鎂1克，硫酸鈣1克，瓊脂25克，水1000 毫升。母種培養(yǎng)基的制作過程及無菌分離技術(shù)同其它食用菌制種技術(shù)，不再介紹。

（2）原種制作

雞腿菇原種制作多采用麥粒種，浴室供暖鍋爐其配制方法如下：麥粒浸泡24小時左右，至麥粒露白，用清水沖洗后煮沸20～25分鐘，撈出瀝干水后加1％石膏粉，20％已粉碎的麥稈發(fā)酵料，然后裝瓶，滅菌、無菌接種與培養(yǎng)。此配方菌絲生長旺盛，生長速度快，在25℃環(huán)境下750毫升菌種瓶12~15天可長滿瓶。

（3）栽培種的制作

雞腿菇栽培種培養(yǎng)基多用棉殼、麥稈發(fā)酵料配制。配方如下：麥稈牛糞發(fā)酵料33%、麩皮10 %、棉籽皮50％、玉米粉5％、石灰2%。先將麥稈粉碎中加牛糞20％～30%，加石膏2％，堆積發(fā)酵5～6天，然后加入其它原料，發(fā)酵48小時即可裝袋滅菌，無菌接種與培養(yǎng)。此配方比單純用發(fā)酵料及單純用棉籽皮有發(fā)酵快、菌絲壯的優(yōu)點。