1．食用菌滅菌鍋爐斜面低溫保藏法

將菌種接種在適合的固體斜面培育基上，待菌充沛成長(zhǎng)后，棉塞部分用油紙包扎好，移至2—8℃的冰箱中保藏。

保藏時(shí)刻依微生物的種類而有不同，霉菌、放線菌及有芽孢的細(xì)菌保存2—4個(gè)月，移種一次。酵母菌兩個(gè)月，細(xì)菌最好每月移種一次。

此法為實(shí)驗(yàn)室和工廠菌種室常用的保藏法，長(zhǎng)處是操作簡(jiǎn)略，運(yùn)用方便，不需特別設(shè)備，能隨時(shí)查看所保藏的菌株是否逝世、變異與污染雜菌等。缺陷是簡(jiǎn)略變異，因?yàn)榕嘤奈锢?、化學(xué)特性不是嚴(yán)厲穩(wěn)定的，多次傳代會(huì)使微生物的代謝改動(dòng)，而影響微生物的性狀；污染雜菌的時(shí)機(jī)亦較多。

 2．液體白臘保藏法

（1）將液體白臘分裝于三角燒瓶?jī)?nèi)，塞上棉塞，并用牛皮紙包扎，1．05kg/cm2>，121．3℃滅菌30分鐘，然后放在40℃溫箱中，使水汽蒸發(fā)掉，備用。

（2）將需求保藏的菌種，在最適合的斜面培育基中培育，使得到強(qiáng)健的菌體或孢子。

（3）用滅菌吸管汲取滅菌的液體白臘，注入已長(zhǎng)好菌的斜面上，其用量以高出斜面頂端1cm為準(zhǔn)（圖Ⅶ-12），使菌種與空氣隔絕。

（4）將試管直立，置低溫或室溫下保存（有的微生物在室溫下比冰箱中保存的時(shí)刻還要長(zhǎng)）。

此法有用而作用好。霉菌、放線菌、芽孢細(xì)菌可保藏2年以上不死，酵母菌可保藏1—2年，一般無(wú)芽孢細(xì)菌也可保藏1年左右，乃至用一般辦法很難保藏的腦膜炎球菌，在37℃溫箱內(nèi)，亦可保藏3個(gè)月之久。此法的長(zhǎng)處是制造簡(jiǎn)略，不需特別設(shè)備，且不需常常移種。缺陷是保存時(shí)有必要直立放置，所占方位較大，同時(shí)也不方便帶著。從液體白臘下面取培育物移種后，接種環(huán)在火焰上炙烤時(shí)，培育物簡(jiǎn)略與殘留的液體白臘一同飛濺，應(yīng)特別留意。

3．濾紙保藏法

（1）將濾紙剪成0．5×1．2cm的小條，裝入0．6×8cm的安瓿管中，每管1—2張，塞以棉塞，1．05kg/cm2>，121．3℃滅菌30分鐘。

（2）將需求保存的菌種，在適合的斜面培育基上培育，使充沛成長(zhǎng)。

（3）取滅菌脫脂牛乳1—2ml滴加在滅菌培育皿或試管內(nèi)，取數(shù)環(huán)菌苔在牛乳內(nèi)混勻，制成濃懸液。

（4）用滅菌鑷子自安瓿管取濾紙條浸入菌懸液內(nèi)，使其吸飽，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。

（5）將安瓿管放入內(nèi)有五氧化二磷作吸水劑的枯燥器中，用真空泵抽氣至干。

（6）將棉花塞入管內(nèi)，用火焰按圖Ⅶ-13熔封，保存于低溫下。

（7）需求運(yùn)用菌種，復(fù)生培育時(shí)，可將安瓿管口在火焰上燒熱，滴一滴冷水在燒熱的部位，使玻璃決裂，再用鑷子敲掉口端的玻璃，待安瓿管敞開(kāi)后，取出濾紙，放入液體培育基內(nèi)，置溫箱中培育。

細(xì)菌、酵母菌、絲狀真菌均可用此法保藏，前兩者可保藏2年左右，有些絲狀真菌乃至可保藏14—17年之久。此法較液氮、冷凍枯燥法簡(jiǎn)潔，不需求特別設(shè)備。

4．沙土保藏法

（1）取河沙參加10％稀鹽酸，加熱煮沸30分鐘，以去除其間的有機(jī)質(zhì)。

（2）倒去酸水，用自來(lái)水沖刷至中性。

（3）烘干，用40目篩子過(guò)篩，以去掉粗顆粒，備用。

（4）另取非耕作層的不含腐植質(zhì)的瘦黃土或紅土，加自來(lái)水浸泡洗刷數(shù)次，直至中性。

（5）烘干，碾碎，通過(guò)100目篩子過(guò)篩，以去除粗顆粒。

（6）按一份黃土、三份沙的份額（或根據(jù)需求而用其他份額，乃至可悉數(shù)用沙或悉數(shù)用土）摻合均勻，裝入10×100mm的小試管或安瓿管中，每管裝1g左右，塞上棉塞，進(jìn)行滅菌，烘干。

（7）抽樣進(jìn)行無(wú)菌查看，每10支沙土管抽一支，將沙土倒入肉湯培育基中，37℃培育48小時(shí)，若仍有雜菌，則需悉數(shù)從頭滅菌，再作無(wú)菌實(shí)驗(yàn)，直至證明無(wú)菌，方可備用。

（8）選擇培育老練的（一般指孢子層成長(zhǎng)飽滿的，養(yǎng)分細(xì)胞用此法作用欠好）優(yōu)秀菌種，以無(wú)菌水洗下，制成孢子懸液。

（9）于每支沙土管中參加約0．5ml（一般以剛剛使沙土潮濕為宜）孢子懸液，以接種針拌勻。

（10）放入真空枯燥器內(nèi)，用真空泵抽干水分，抽干時(shí)刻越短越好，務(wù)使在12小時(shí)內(nèi)抽干。

（11）每10支抽取一支，用接種環(huán)取出少數(shù)沙粒，接種于斜面培育基上，進(jìn)行培育，調(diào)查成長(zhǎng)狀況和有無(wú)雜菌成長(zhǎng)，如呈現(xiàn)雜菌或菌落數(shù)很少或底子不長(zhǎng)，則闡明制造的沙土管有問(wèn)題，尚須進(jìn)一步抽樣查看。

（12）若經(jīng)查看沒(méi)有問(wèn)題，用火焰熔封管口，放冰箱或室內(nèi)枯燥處保存。每半年查看一次生機(jī)和雜菌狀況。

（13）需求運(yùn)用菌種，復(fù)生培育時(shí)，取沙土少量移入液體培育基內(nèi)，置溫箱中培育。

此法多用于能發(fā)生孢子的微生物如霉菌、放線菌，因而在抗生素工業(yè)出產(chǎn)中使用最廣，作用亦好，可保存2年左右，但使用于養(yǎng)分細(xì)胞作用欠安。